Анализ пцр

Эффективность процедуры

Обнаружение вируса у пациентов с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) свидетельствует о наличии активной инфекции и потенциально полезно для подтверждения диагноза и мониторинга антивирусного ответа на терапию.

Оптимальные анализы ПЦР в настоящее время имеют чувствительность менее 100 копий РНК ВГС на миллилитр плазмы или сыворотки

Стандартизация и проверка качества диагностических лабораторий, выполняющих ПЦР ВГС, остается важной проблемой для будущего исследования

Основными ограничениями текущих тестов являются неадекватный динамический диапазон, высокая вариабельность анализов на основе ПЦР и низкая чувствительность теста ДНК с разветвленной цепью. Молекулярные тесты также разработаны для классификации ВГС на отдельные генотипы.

Лучшие материалы месяца

Коронавирусы: SARS-CoV-2 (COVID-19)
Антибиотики для профилактики и лечения COVID-19: на сколько эффективны
Самые распространенные «офисные» болезни
Убивает ли водка коронавирус
Как остаться живым на наших дорогах?

Проблема профессионального донорства крови и небезопасных методов инъекций является потенциальным источником заражения гепатитом С во всем мире. Все практикующие врачи должны понимать, как установить или исключить диагноз инфекции ВГС и правильно интерпретировать тесты.

В отсутствие профилактической или терапевтической вакцины, а также постконтактной профилактики против вируса, необходимо диагностировать инфекцию ВГС, чтобы предотвратить заражение и последующие осложнения, включая первичную гепатоцеллюлярную карциному.

Тем не менее очень многое зависит от самого пациента. Если человек замечает у себя хотя бы некоторые подозрения на инфицирование или ощущает определенные симптомы (хроническая усталость, сонливость, потеря сил) – необходимо обратиться к лечащему врачу за направлением на анализ ПЦР на гепатит С.

Источники

Малыш П. Н. с соавторами. Полимеразная цепная реакция в диагностике гемотрансмиссивных инфекций – Украинский журнал клинической и лабораторной медицины, т. 4, № 284, 2009, с. 121 – 123.

Больше свежей и актуальной информации о здоровье на нашем канале в Telegram. Подписывайтесь: https://t.me/foodandhealthru

Автор статьи:

Извозчикова Нина Владиславовна

Специальность: инфекционист, гастроэнтеролог, пульмонолог.

Общий стаж: 35 лет.

Образование: 1975-1982, 1ММИ, сан-гиг, высшая квалификация, врач-инфекционист.

Другие статьи автора

Редактор статьи:

Момот Валентина Яковлевна

Специальность: Онкология.

Место работы: Институт экспериментальной патологии, онкологии и радиобиологии им. Р. Е. Кавецкого НАН Украины.

Все отредактированные статьи редактора

Будем признательны, если воспользуетесь кнопочками:

Ведение беременности и родов при положительных анализах

Сифилис

При получении положительных результатов анализов на сифилис, обязательно решается вопрос о давности перенесенного сифилиса, либо его наличия в данный момент. Если сифилис был пролечен достаточно давно, но анализы по-прежнему остаются положительными, проводится профилактическое лечение антибиотиками в сроке 20-24 недели беременности, а ребенок после рождения обязательно проверяется на наличие врожденного сифилиса. В таких ситуациях, при разрешении врача-венеролога роды могут вестись в обычных роддомах.

В случае подтвержденного заболевания сифилисом во время беременности женщина в обязательном порядке госпитализируется в специализированный кожно-венерологический стационар для проведения антибактериального лечения. Для лечения чаще используют антибиотики пенициллиновой группы – Пенициллин, бициллин, экстенциллин или эритромицин и цефтриаксон (при непереносимости пенициллина). Длительность лечения зависит от стадии заболевания — при первичном сифилисе лечение продолжается несколько недель, при третичном – несколько лет. Всем беременным, которые проходили курс лечения во время беременности, дополнительно проводится профилактический курс антибиотиками еще в 20-24 недели. После рождения всем детям, родившимся от больных матерей, не прошедшим полные курсы лечения и профилактики, также проводят профилактический курс лечения антибиотиками.

В настоящее время не существует четких рекомендаций, в каких случаях необходимо прерывать беременность при сифилисе. Современные методы лечения сифилиса позволяют предотвратить врожденный сифилис при выявлении заболевания у матери в первую половину беременности. Если же сифилис выявлен позже 12 недель беременности, то лечение беременной является уже и лечением плода. Роды пациенток с сифилисом ведутся обязательно в специализированных родильных домах.

ВИЧ –инфекция

При выявлении ВИЧ-инфекции во время беременности женщина обязательно направляется к инфекционисту-вирусологу для решения вопроса о возможности пролонгирования беременности, поскольку беременность из-за естественного снижения иммунитета может ускорить и ухудшить течение ВИЧ-инфекции. Ведение беременности осуществляется совместно акушером-гинекологом и инфекционистом-вирусологом. Во время беременности лечение ВИЧ-инфекции проводится Зидовудином под контролем иммунологического статуса беременной женщины. Этот препарат проникает через плаценту и снижает вероятность заражения плода в 3 раза. Роды ВИЧ-инфицированных женщин ведутся в специализированных роддомах. Если во время беременности противовирусная терапия проводилась, роды ведутся через естественные родовые пути, при отсутствии терапии во время беременности показано кесарево сечение для снижения риска инфицирования малыша. Грудное вскармливание ВИЧ-инфицированным женщинам противопоказано, поскольку очень часто инфицирование ребенка ВИЧ происходит именно через грудное молоко.

Как сдать анализ ПЦР правильно: подготовка

Чтобы понять, как именно следует подготовиться к предстоящему анализу ПЦР, пациент должен обязательно уточнить у своего врача, какой именно биологический материал планируется взять. От этого непосредственно зависит подготовка.

Выделения из половых органов, мазок из шейки матки или мочеиспускательного канала, моча – посредством исследования данных вариантов материала методом ПЦР эффективно диагностируются инфекции половых органов.
Вирусный гепатит C, ВИЧ инфекция требуют взятие крови на анализ ПЦР.
С помощью мазка из зева можно подтвердить или опровергнуть факт наличия инфекционного мононуклеоза.

Как передается вирус гепатита В?

Основной источник вируса гепатита В – кровь. Он может также находиться в других тканях и жидкостях человека, но в намного более низких концентрациях. Риск передачи варьируется в зависимости от конкретного источника.

Как передается вирус гепатита В

Вирус может существовать вне организма в течение не менее 7 дней и при этом вызывать инфекцию.

Кровь. Прямой контакт с зараженной кровью может передать вирус гепатита В через:

Уколы кожи иглами, ланцетами, скальпелями или другими острыми предметами, загрязненными кровью.
Прямой контакт с открытыми ранами зараженного человека.
Брызги, при попадании на кожу с незначительными царапинами, ссадинами, ожогами или даже незначительными высыпаниями.
Брызги на слизистые оболочки рта, носа или глаз.

Вирус гепатита В может также передаваться при косвенном контакте с загрязненными кровью поверхностями, правда, в меньшей степени. На слизистые оболочки можно перенести возбудителя через руки, загрязненные инфицированной кровью.

Вирус может оставаться стабильным в засохшей крови до 7 дней при 25 °C.

Слюна. Слюна людей с гепатитом В содержит вирус В, но в очень низких концентрациях по сравнению с кровью. Заражение возможно при попадании зараженной слюны в кровь при укусе.

Другие биологические жидкости и ткани. Возбудитель гепатита В обнаружен в сперме и влагалищных выделениях. Вирус может передаваться как во время незащищенного полового акта, так и от матери ребенку во время родов.

Синовиальная жидкость, амниотическая жидкость, спинномозговая жидкость и жидкость, обнаруженная в брюшной полости, тоже могут содержать вирус гепатита В, но риск передачи медицинским работникам при таком контакте неизвестен.

Фекалии, выделения из носа, мокрота, пот, слезы, моча не причастны к распространению гепатита В. Если они явно не загрязнены кровью, риск заражения гепатитом В при контакте с этими жидкостями очень низок.

Как правило, гепатит В не передается при случайном контакте. Однако вирус может распространяться через тесный контакт с носителями в домашних условиях, возможно, из-за частого физического соприкосновения, особенно при наличии микротравм или кожных высыпаний. Вирус также может распространяться при укусе, например, при играх с детьми. Кроме того, источником острых инфекций может быть использование острых инструментов – бритв, зубных щеток, кусачек для ногтей, серег.

Возбудитель гепатита В не распространяется через чихание, кашель, рукопожатия, объятия, поцелуи, кормление грудью, совместное использование посуды, воды или еды.

Пирсинг, татуировка, иглоукалывание и даже маникюрные салоны – это другие потенциальные пути заражения, если не использовать стерильные иглы и оборудование.

Таким образом, вирус гепатита В (ВГВ) передается через зараженную кровь и инфицированные жидкости организма другим людям при помощи:

прямого контакта с кровью;
незащищенного полового акта;
инъекций запрещенных наркотиков;
нестерилизованных инфицированных медицинских инструментов;
от зараженной женщины ее новорожденному во время беременности или родов.

О вирусе гепатита В: структура, жизненный цикл

Вирус гепатита В представляет собой небольшой вирус ДНК, принадлежащий к семейству Hepadnaviridae. Связанные вирусы в этом семействе также найдены в сурках, сусликах, белках, пекинских утках и цаплях.

Возбудитель содержит внешнюю оболочку и внутреннее ядро:

Внешняя оболочка вируса состоит из поверхностного белка, называемого поверхностным антигеном гепатита В или «HBsAg». HBsAg (“австралийский”) может быть обнаружен с помощью простого анализа крови. Положительный результат теста указывает на то, что человек заражен вирусом гепатита В (маркер).
Внутреннее ядро вируса представляет собой белковую оболочку, называемую ядерным антигеном гепатита В или «HBcAg», которая содержит ДНК вируса гепатита В и ферменты, используемые для репликации вируса. HBeAg входит в состав HBcAg. Он в свободной форме выявляется в крови зараженного и отражает степень репликации вируса. В этот период кровь инфицированного максимально заразна.

Подготовка к сдаче анализа

За 72 часа до сдачи биоматериала на ПЦР нужно полностью отказаться от употребления алкоголя. Также по назначению врачей могут быть отменены некоторые антибиотики.
За 48 часов необходимо исключить нагрузки. В день сдачи биоматериала запрещается принимать пищу, а также курить.
При необходимости сдачи материала на анализ из ротовой полости или носоглотки запрещается в день исследования чистить зубы.

При диагностике ЗППП:

Не вступать в половой контакт 48 часов до анализа.
Подмываться разрешено без любых гигиенических средств, последнее спринцевание не позже чем за 12 часов.
За 2 часа до взятия биоматериала не мочиться.
Запрещается сдавать анализ во время менструаций и на протяжении 4 дней после колоноскопии.

Точность и информативность диагностики будет зависеть от соблюдения этих несложных правил.

Медицинский центр Первый Доктор на Киевской

Сеть клиник. Основной деятельностью клиники является оказание медицинских услуг как в клиниках, так и на дому, а именно: анализы, гастроэнтерология, гинекология, гомеопатия, дерматология, кардиология, ЛОР, маммология, неврология, офтальмология, стоматология, травматология, урология, флебология, хирургия, эндокринология и др. В клинике на Киевской проводят ряд диагностик: УЗИ, 3D УЗИ, 4D УЗИ, биопсию, гастроскопию, ДС (дуплексное сканирование), кардиотокографию (КТГ), суточное ЭКГ мониторирование (по Холтеру), суточное мониторирование АД, ЭКГ-проба с дозированной физической нагрузкой (велоэргометрия или тредмил-тест), кольпоскопию, ЭФГДС, ЭКГ, ЭХОКГ.

Возможен ли ошибочный результат

Несмотря на то, что ПЦР дает высокую достоверность результатов возможно появление ошибочных данных. Они могут быть обусловлены:

Нарушением правил проведения исследования.
В крови находятся в больших количествах вещества, которые препятствуют нормальной свертываемости (гепарин).
Наличием веществ, которые задерживают обменные процессы в организме.
Загрязнение исследуемого образца.

Для получения более точных данных стоит воспользоваться услугами лаборатории у которой высокая чувствительность диагностической системы (не ниже 50 МЕ/мл). Все лаборатории предоставляют анализы крови на гепатит с расшифровкой поскольку у каждой из них есть свои единицы измерения.

Суть метода полимеразной реакции

У каждого живого организма имеется свой уникальный набор хромосом. Ни у одного существа он не повторяется, но все хромосомы образованы ДНК — дезоксирибонуклеиновой кислотой. ДНК состоит из множества мельчайших молекул, называемых нуклеотидами.

Последовательности цепочек этих молекул образуют гены. Гены же отвечают за кодировку синтеза огромного количества белков, таких, как глобулин, коллаген и т. д.

Последовательность нуклеотидов у каждого организма уникальна, за исключением схожих участков ДНК, отвечающих за относительное однообразие в пределах вида организма. Методом ПЦР находят фрагменты нуклеиновой кислоты и определяют, какому виду микроорганизма они принадлежат.

Но анализ ДНК небольшого количества микробов будет малоинформативен. Чтобы иметь возможность выявить и исследовать определенные видовые закономерности, необходимо увеличить количество нуклеотидов во много сотен раз. Для этого также используют методику ПЦР.

Чтобы получить достаточное количество материала для проведения исследования, к ДНК микроорганизма добавляют определенные нуклеотиды, а также ДНК-полимеразу. Этот фермент обеспечивает многократное копирование интересующего исследователей участка.

Катализатором (веществом, запускающим реакцию) процесса служат нити РНК, крепящиеся к гену, который и необходимо изучить. За несколько часов анализа всего из одного нуклеотида можно получить достаточное количество материала для исследований.

Достоинства и недостатки метода ПЦР

Анализ ПЦР – результативный диагностический инструмент, позволяющий врачу не только правильно определить тип инфекционного возбудителя в организме больного, но также и количество микробов. Эта особенность позволяет методу ПЦР эффективно обнаруживать и хронические инфекции, к примеру, вирусный гепатит.

Преимущества методики заключаются в следующих особенностях:

Универсальность. Метод дает возможность определить все известные на сегодняшний день микроорганизмы, вне зависимости от вида исследуемого материала.
Специфичность. ПЦР позволяет определить ДНК вируса или бактерии со 100% точностью, что не дает ни один другой способ диагностики.
Чувствительность – даже один мельчайший «обломок» ДНК или РНК может быть обнаружен и идентифицирован, благодаря быстрой реакции образования копий.
Оперативность – поставить диагноз на основании полимеразной цепной реакции можно уже через несколько часов после забора биологического материала, что дает возможность своевременно приступить к лечению заболевания.
Возможность проведения количественного анализа. Эта особенность важна при выявлении болезней, вызванных условно-патогенной флорой (например, молочницы). Повышенное содержание грибков кандида в организме вызывает заболевание, а нормальное количество до 10 3 — 104 КОЕ/тамп. – нет.

Недостатки ПЦР-диагностики – это необходимость в высокотехнологичном оборудовании и высококвалифицированных специалистах. Для анализа нужен специальный бокс-ламинар, где поддерживается необходимая температура и обеспечивается чистота эксперимента.

Мазок у женщин

Для диагностики половых инфекций методом ПЦР у женщин, как правило, берут мазок из влагалища. При беременности действуют стандартные правила подготовки к анализу ПЦР.

За пару дней до проведения ПЦР нужно отказаться от спринцеваний, средств интимной гигиены.
За неделю до анализа на инфекции стоит перестать применять любые виды лекарственных препаратов, разумеется, если они не входят в программу подготовки к анализу ПЦР, прописанную врачом.
За пару дней до обследования нужно начать воздерживаться от полового акта.
Подмывание в день анализа ПЦР не нужно, гигиена половых органов проводится накануне вечером, используется только теплая вода.
За пару часов до сдачи анализа мочиться нельзя.

Когда назначается анализ

Анализ ПЦР на гепатит является одним из наиболее точных диагностических методов лабораторных исследований. Качественный тип исследования назначается в первую очередь, дополнительные исследования или повторный анализ назначается только после получения положительного результата анализа. Исследование назначается в следующих случаях:

По желанию пациента. Любой человек может провериться на наличие заболеваний, обратившись к врачу. Коммерческая лаборатория проведет платное исследование, а врач расшифрует результаты.
При постановке на учет беременных или при планировании зачатия желательно сдать анализа на тяжелые вирусные заболевания, в том числе гепатит.
После контакта с больным, следует обязательно сдать соответсвубщие анализы.
После посещения стран с антисанитарными условиями врачи рекомендуют пойти медосмотр. Попадание фекальных масс в воду прямой путь к заражению гепатитом и другими тяжелыми заболеваниями.
Если в садике или школе, в который учится ребенок обнаружен гепатит С, необходимо проконсультироваться с врачом и, возможно, пройти обследование.

Анализ крови на гепатит может проводиться для скрининговых исследований и предотвращения эпидемий. Такие тесты проводятся в определенных географических зонах, где были обнаружены вспышки гепатита С (населенные пункты, районы города и пр.), места социального скопления людей (работники одной организации, учебные заведения и пр.).

Анализ на гепатит С: анти HСV

Антитела к вирусам (анти HCV) являются специфическими маркерами инфицирования. В организме больного человека к белкам вируса (антигенам) вырабатываются специфические антитела — иммуноглобулины класса IgM и IgG (анти HCV IgM/IgG).

При получении положительного результата на антитела выполняется подтверждающий тест — определение суммарных антител к структурным и неструктурным белкам вируса. К структурным оболочечным белкам вируса Е1 и Е2 вырабатываются aнти HCV IgM, нуклеокапсидному белку С — cor (aнти HCV IgG), к 7-и неструктурным белкам-ферментам NS (aнти HCV NS IgG).

Для выявления антител к вирусу гепатита С используется иммуноферментный анализ (ИФА). Для подтверждения (+) результатов ИФА применяют подтверждающие тесты — RIBA (рекомбинатный иммуноблотинг), реже Inno-Lia (анализ синтетических пептидов).

Анализ на анти HCV IgM

Антитела IgM появляются в сыворотке крови через 4 — 6 недель после инфицирования и быстро достигают максимума. По окончании острого процесса (через 5 — 6 мес.) их концентрация падает.
Длительная регистрация наличия анти HCV IgM говорит о том, что гепатит С приобрел хроническое течение.
Повышение уровня IgM в период хронического течения говорит о реактивации инфекционного процесса.
Уровень иммуноглобулинов IgM позволяет проводить оценку эффективности лечения.

Анализ на анти HCV IgG

Антитела IgG появляются в сыворотке крови больного через 11 — 12 недель после инфицирования. На 5 — 6 месяце регистрируется пик концентрации. Далее антитела сохраняются на постоянном уровне в течение всего срока заболевания в острый период и период выздоровления.

Анализ на суммарные антитела к вирусу гепатита С

Суммарные антитела к вирусу (аnti HCV total) используются для диагностики «свежих» случаев заболевания. Суммарные антитела — это антитела нуклеокапсидному белку С — cor (aнти HCV IgG) и 7-и неструктурным белкам-ферментам NS (aнти HCV NS IgG) — aнти HCV NS3, aнти HCV NS4 и aнти HCV NS5.

Суммарные антитела к вирусу гепатита С появляются в сыворотке крови инфицируемого спустя 11 — 12 недель от начала инфицирования, достигают пика к 5 — 6 месяцу и сохраняются на постоянном уровне в течение всего срока заболевания в острый период и в течение 5 — 9 лет после периода выздоровления.

Каждый из видов антител имеет самостоятельное диагностическое значение:

Анти HCV C (cor) являются основными показателями контакта с вирусами гепатита С.
Анти HCV NS3 выявляются одними из первых в процессе сероконверсии (выработки антител в ответ на присутствие вируса), указывают на остроту инфекционного процесса и свидетельствуют о высокой вирусной нагрузке. С их помощью определяется гепатит С у больных, не подозревающих у себя наличие инфекции. Продолжительное нахождение анти HCV NS3 в сыворотке крови говорит о высоком риске хронизации процесса.
Анти HCV NS4 говорят о том, что гепатит С имеет длительное течение. По уровню титров антител можно судить о степени поражения печени.
Анти HCV NS5 указывают на наличие вирусной РНК. Их обнаружение в острый период является предвестником хронизации процесса. Высокие титры антител на фоне лечения говорят о том, что больной не отвечает на лечение.
Анти HCV NS4 и анти HCV Данный вид антител появляются на поздних сроках развития гепатита. Их снижение указывает на формирование ремиссии инфекционного процесса. После излечения титры антител NS4 и NS5 снижаются в течение 8 — 10 лет. От повторного заражения этот вид антител не защищает.

Рис. 2. Макропрепарат. Цирроз печени — грозное осложнение вирусного гепатита С.

Алкогольный гепатит: что это

При алкогольном гепатите происходит скопление жировых капель внутри печеночной клетки – это приводит к ее разрушению. При распространении процесса и гибели большого количества гепатоцитов происходит замещение участков печени соединительной тканью. Опасность кроется в том, что участки фиброза не выполняют функцию очистки организма. Печень не справляется с очистительной функцией, токсические соединения не покидают организм, отравляя его.

По характеру течения принято выделять две клинические формы заболевания:

Хронический алкогольный гепатит – продолжительный (на протяжении более полугода) процесс, при котором преобладают дегенеративные процессы. Возникает при длительном употреблении небольших доз спиртных напитков. Наиболее вероятный исход – цирроз печени. Сколько живут при этой форме заболевания? При своевременной диагностике и полном исключении из рациона алкоголя прогноз благополучный.
Острый алкогольный гепатит – процесс, при котором преобладают воспалительные процессы. Заболевание характеризуется быстрым ухудшением состояния органа, обусловлено это повышением уровня антител, направленно разрушающих собственные печеночные клетки. Продолжительность заболевания составляет менее 6-ти месяцев, отмечается после употребления алкоголя в больших количествах. За этот промежуток времени патология трансформируется в цирроз печени у четверти больных.

Причины болезни

Алкогольный гепатит развивается по причине повреждения тканей и клеток печени. При расщеплении этанола печень производит токсичные химические вещества, которые вызывают воспаление, а затем разрушение клеток. Со временем развития патологии здоровые клетки печени заменяются рубцовыми, происходит нарушение ее функции. Если не начать лечение гепатита, то постепенно вся печень покрывается рубцами и перейдет в цирроз.

Факторы риска

Возникновение и развитие гепатита на фоне злоупотребления спиртным становится возможным, если присутствуют следующие факторы:

Неправильное питание. В ежедневном рационе наблюдается дефицит овощей, фруктов и мясных продуктов;
Заражение вирусами, которые разрушительно воздействуют на клетки печени;
Лечение гепатотоксическими травами и лекарственными средствами;
Сниженный иммунитет на фоне частого злоупотребления алкоголя;
Наследственная предрасположенность.

Клиническое протекание алкогольного гепатита связано с совокупностью всех факторов. В зависимости от длительности и симптоматики болезнь может принимать острую и хроническую форму.

Симптомы алкогольного гепатита

Одним из распространенных симптомов алкогольного гепатита является генерализованная желтуха. Человек начинает худеть, и его кожа приобретает желтый оттенок. К остальным проявлениям относятся:

Тошнота, рвота, потеря аппетита;
Лихорадка;
Слабость и вялость;
Почечная и печеночная недостаточность;
Асцит;
Нарушение пищеварения.

У больных отмечается частое повышение температуры тела, а также развитие заболеваний мочеполовой системы.

Билирубинурия

При гепатите у пациентов отмечается патологическое состояние – билирубинурия. Проявляется состояние присутствием в моче высокой концентрации билирубина. Вещество окрашивает мочу в темно-коричневый оттенок. Уровень билирубина не имеет большого уровня содержания на начальной стадии развитию. Он повышается с нарушением функции оттока желчи. Билирубин моче присутствовать в моче здоровых людей, но его количество не определяется стандартными способами. Большое количество говорит о серьезной патологии.

Гиперхолестеринемия

Состояние сопровождается нарушением липидного состава крови по причине повышения в ней концентрации холестерина. Такое изменение часто наблюдается при гепатитах и циррозах печени. Гиперхолестеринемия связана с нарушением выделительной функции печени или со снижением синтеза. Патологическое нарушение можно выявить при сдаче развернутого анализа состояния крови.

Глюкозурия

В нормальном состоянии моча человека не содержит глюкозу. При алкогольном гепатите наблюдается ее наличие. Это происходит потому что почки не справляются с функцией возврата глюкозы в кровоток. В большинстве случаев глюкозурия является симптомом развития сахарного диабета. Длительное выделение с мочой глюкозы приводит к развитию воспалительных процессов в мочеполовой системе. Корректируется уровень глюкозы путем лечения основного заболевания.